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培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質

  • 發布日期:2020-09-09      瀏覽次數:1407
    •   培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。
        1、培養基的過濾澄清
        液體培養基必須澄清,瓊脂培養基也應透明無顯著沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求.一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂.
        瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾.亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾.新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾.如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法.即將冷卻至55至60℃的培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000毫升培養基加入1至2個雞蛋的蛋白,強力振搖3至5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可.
        2、培養基的分裝
        培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內.分裝量不得超過容器裝盛量的2/3.容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者).分裝時好能使用半自動或電動的定量分裝器.分裝瓊脂斜面培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當.分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的*滅菌.每批培養基應另外分裝20毫升培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基終pH之用.
        3、培養基的滅菌
        一般培養基可采用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法.在各種培養基制備方法中,如無特殊規定,即可用此法滅菌.
        某些畏熱成分,如糖類,應另行配成20%或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以后再用無菌操作技術、定量加于培養基.明膠培養基亦應用較低溫度滅菌.血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入于經冷卻約50℃左右的培養基中.
        瓊脂斜面培養基應在滅菌后立即取出,冷至55℃-60℃時,擺置成適當斜面,待其自然凝固.
        4、培養基的質量測試
        每批培養基制備好以后,應仔細檢查一遍,如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去.并測定其終pH.
        將全部培養基放入36±1℃恒溫箱培養過夜,如發現有菌生長,即棄去.
        用有關的標準菌株接種1至2管或瓶培養基,培養24至48小時,如無菌生長或生長不好.應追查原因并重復接種一次,如結果仍同前,則該批培養基即應棄去,不能使用.
        5、培養基的保存
        培養基應存放于冷暗處,好能放于普通冰箱內.放置時間不宜超過一周,傾注的平板培養基不宜超過3天.每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽.
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