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    Lentiviral 慢病毒制備

    簡(jiǎn)要描述:慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性:整合入宿主細(xì)胞基因組,長(zhǎng)期表達(dá),可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性:比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細(xì)胞,更重要的,還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調(diào)控、過表達(dá)特定基因或沉默特定基因。

    • 產(chǎn)品型號(hào):
    • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
    • 更新時(shí)間:2024-05-13
    • 訪  問  量:2841

    慢病毒包裝服務(wù)

    慢病毒簡(jiǎn)介

        慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性:整合入宿主細(xì)胞基因組,長(zhǎng)期表達(dá),可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組份和特性:比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細(xì)胞,更重要的,還能感染非分裂期的細(xì)胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調(diào)控、過表達(dá)特定基因或沉默特定基因。

    慢病毒包裝技術(shù)特點(diǎn)

    病毒表達(dá)系統(tǒng)

    腺病毒表達(dá)系統(tǒng)

    慢病毒表達(dá)系統(tǒng)

    病毒基因組

    雙鏈DNA病毒

    RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒

    自主復(fù)制

    不能

    不能

    是否整合

    病毒基因組游離于宿主基因組外,瞬時(shí)表達(dá)外源基因

    病毒基因組整合于宿主基因組,長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因

    感染細(xì)胞類型

    感染絕大多數(shù)細(xì)胞,包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。

    感染絕大多數(shù)細(xì)胞,包括分裂期、非分裂期細(xì)胞。

    表達(dá)豐度

    高水平表達(dá)

    中水平表達(dá)

    表達(dá)時(shí)間

    快(1-2 天)

    慢(2-4 天)

    滴度

    滴度可達(dá)10E12pfu/mL

    滴度可達(dá)10E9-10E10TU/mL

    克隆容量

    可插入高達(dá)8kb的外源片段,滴度隨插入片段長(zhǎng)度增加而降低

    可插入不超過8kb的外源片段,滴度隨插入片段長(zhǎng)度增加而降低

    免疫原性

    高免疫原性

    低免疫原性

    RNAi

    病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng),一般情況下不適合做RNAi實(shí)驗(yàn)

    適合,是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具

    基因過表達(dá)

    包裝容量較大,可以滿足較大基因的包裝,是過表達(dá)基因的優(yōu)選工具

    包裝容量有限,過表達(dá)的基因過大時(shí),病毒滴度受到影響

    過表達(dá)microRNA

    適合

    適合,是過表達(dá)microRNA實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具

    下調(diào)microRNA

    有報(bào)道但不成熟

    有報(bào)道但不成熟

    是否可以自行擴(kuò)增

    可以

    需要特殊包裝系統(tǒng)和包裝環(huán)境

    A. 慢病毒載體的構(gòu)建:

    根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體,如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達(dá)的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等;

    B. 慢病毒包裝過程:

        將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中,收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液,對(duì)其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液,在293T細(xì)胞中測(cè)定并標(biāo)定病毒滴度。

    C. 慢病毒包裝結(jié)果:

    滴定濃度:1×107~1×108TU/ml

    zui終體積:1 ml純化后的病毒液(儲(chǔ)存于PBS)

    儲(chǔ)存:批量?jī)?chǔ)存的*條件為-80°C。

    慢病毒包裝用途:

    慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后,可用于:

    · 感染原代細(xì)胞;

    · 制備穩(wěn)定表達(dá)/沉默特定基因的單克隆細(xì)胞株;

    · in vivo的基因操作;

    · 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,特別是轉(zhuǎn)基因大鼠的制備。

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